Описание
Петрифильм 3M Petrifilm E.coli/Coliform Count (ЕС) – содержит питательную основу среды VRB (кристаллический фиолетовый с желчью), гель, растворимый в холодной воде, который застывает при комнатной температуре, хромогенный субстрат для выявления глюкуронидазной активности (5-бромо-4-хлор-3-инолил-ß-глюкуронид – BCIG), тетразолиевый индикатор, который облегчает подсчет колоний. Петрифильмы (ЕС) используются для подсчета E.coli и колиформных бактерий в продуктах, сырье, а также при производстве безалкогольных напитков.

Хранение и утилизация
Хранить невскрытые упаковки с петрифильмами следует в холодильнике при температуре 2-8°C. Перед вскрытием упаковки с петрифильмами дать упаковке нагреться до комнатной температуры. Неиспользованные петрифильмы поместить обратно в упаковку. Запечатать упаковку скотчем. Чтобы предотвратить контакт с влагой, не следует хранить открытые упаковки в холодильнике. Хранить вновь запечатанные упаковки в сухом прохладном месте не более одного месяца. Нахождение вскрытых упаковок петрифильмов при температуре более 25°C и/или относительной влажности свыше 50% может повлиять на их эксплуатационные качества. Не использовать петрифильмы, на которых произошло обесцвечивание среды. Срок годности и номер партии указаны на каждой упаковке петрифильмов.

Как и все системы для тестирования микроорганизмов, петрифильмы после использования могут содержать жизнеспособные бактерии, что может представлять потенциальную опасность. Следуйте современным методам инактивации и утилизации биологического материала.

Инструкция использования

Подготовка образца
1. Для разбавления образца использовать 0,1% пептонную воду, забуференную петонную воду, таблетки Рингера, физиологический раствор или дистиллированную воду. 
Не использовать буферные растворы, содержащие цитрат, бисульфит или тиосульфат, т.к. эти соединения могут ингибировать рост бактерий.
2. Смешать и гомогенизировать образец.
3. Для оптимального роста бактерий довести рН разведенного образца до 6,6–7,2. Для коррекции рН кислых образцов используйте 1 н. NaOH. pH щелочных образцов довести с помощью 1 н HCl. 

Внесение образца
1. Поместить петрифильм Petrifilm E.coli/Coliform Count (ЕС) на ровную поверхность.
2. Поднять верхнюю пленку и внести 1 мл разведенного образца на поверхность питательной подложки (в центр) петрифильма Petrifilm E.coli/Coliform Count (ЕС).
3. Опустить верхнюю пленку (прокатывая) на образец. Избегать захвата пузырьков воздуха. 
4. Сразу же поместить пластиковый распределитель в центр петрифильма ровной стороной вверх. Мягко надавить на центр распределителя для равномерного распределения образца. 
5. Не скользить распределителем по пленке!
6. Убрать распределитель и оставить петрифильм на одну минуту для затвердевания геля.

Инкубация
Инкубировать петрифильмы в горизонтальном положении прозрачной стороной вверх. Петрифильмы можно группировать в количестве не более 20 штук. Инкубировать петрифильмы в течение (24±2) часов при (37±1)°C. В некоторых случаях (для выявления E.coli) следует продлить инкубацию до (48±4) часов при (37±1)°C. Установить емкость с водой для создания повышенной влажности в термостате. 

Интерпретация
1) Количество колоний на петрифильмах можно учесть автоматически с помощью Petrifilm Plate Reader (PPR) (Петрифильм Ридера) или с помощью стандартного счетчика колоний или другого подсвечиваемого увеличителя. Не следует учитывать колонии на пенопластовом ограничителе зоны роста, они лишены селективных условий роста. Не следует учитывать пузырьки-артефакты, которые могут присутствовать на петрифильме.

Для учета E.coli следует подсчитать количество синих и красно-синих колоний, связанных с пузырьками газа, независимо от размера колоний и интенсивности окраски. Синие колонии без образования газа не учитываются как подтвержденные колонии E.coli.

Другие колиформные бактерии образуют колонии красного цвета, которые связаны с образованием пузырьков газа. Колонии, которые не связаны с образованием пузырьков газа, не учитываются как колиформные бактерии.

Общее количество колиформных бактерий, включает как красные, так и синие колонии, связанные с образованием газа в течение 24-48 часов.

Штаммы E.coli O157 не учитываются на петрифильмах данного типа, поскольку не обладают глюкуронидазной активностью, характерной для  E.coli.

2) Зона роста составляет примерно 20 см². Можно проводить учет колоний на петрифильмах, если их численность превышает 150 колоний. В этом случае подсчитывают количество колоний в одном или более репрезентативных квадратах и определяют среднее количество колоний в квадрате. Умножив среднее количество колоний на 20, получают число колоний на петрифильме.

3) При большой концентрации колоний на петрифильме может происходить потемнение цвета геля в зоне роста с наличием большого количества мелких, едва различимых колоний, а также много пузырьков газа. При высоких концентрациях E.coli зона роста может изменять цвет в голубой, тогда как высокие концентрации неколиформных бактерий вызывают изменение цвета зоны роста в темно-красный. В этих случаях результат фиксируется как слишком большое количество для подсчета. В этом случае необходимо приготовить разведение образца для получения более точного результата.

4) Колонии можно изолировать для дальнейшей идентификации. Для этого следует поднять верхнюю пленку и извлечь колонию из геля. Идентифицировать колонию с использованием стандартных методов.

5) По окончании инкубации петрифильмы можно хранить в морозильнике в течение одной недели при температуре (-15C°) для последующего учета. Проводится в тех случаях, когда нет возможности учесть численность сразу после инкубации.

3М Petrifilm Enterobacteriaceae Count Plate (EB) – Петрифильм для определения энтеробактерий   Рис.1.  Количество энтеробактерий = 13  Индикатор окрашивает колонии в красный цвет. Верхняя пленка задерживает пузырьки, которые продуцируют бактерии. Бактерии, образующие кислоту - это красные колонии, окруженные желтой зоной подкисления. Бактерии, продуцирующие газ и/или кислоту предположительно относятся к Enterobacteriaceae. На петрифильме колонии энтеробактерий могут быть образовывать газ, но не кислоту (нет желтых зон подкисления) (Рис.1, кружок 1); колонии могут образовывать желтые зоны подкисления, но без образования газа (Рис.1, кружок 2); колонии, могут продуцировать и газ, и кислоту. На Рис.1 представлены различные примеры образования пузырьков. Иногда газ разрывает колонии, так, что колония обрисовывает пузырек, как показано (Рис.1, кружок 3).  Рис.2.  Количество энтеробактерий = 9  На Рис.2 показано несколько колоний энтеробактерий и большое количество грамотрицательных не энтеробактерий. Не учитывать колонии на пенопластовом ограничителе, так как колонии не находятся в селективных условиях среды.   Рис.3  Количество энтеробактерий = 0  Отметить изменение цвета геля на Рис.3-8. При увеличении количества энтеробактерий цвет геля становится более светлым и меняется от пурпурного до желтого или кремового цвета.  Рис.4  Количество энтеробактерий = 35   Рис.5.  Количество энтеробактерий = 77  Рекомендуемый диапазон учета энтеробактерий на петрифильме составляет 15-100 колоний. Образцы, которые содержат более 100 колоний энтеробактерий, могут быть учтены приблизительно. Круговая зона роста составляет примерно 20 см2. Подсчитывается количество колоний в одном или более репрезентативных квадратах и определяется среднее количество колоний в квадрате. Умножить среднее количество колоний в квадрате на 20, чтобы получить количество колоний на петрифильме.  Слишком большое количество колоний для подсчета (для точного результата следует разбавить образец)   Рис.6.  Количество = слишком много колоний  Если на петрифильме слишком много колоний для подсчета, то цвет геля петрифильма становится светлым, появляется много мелких колоний или много пузырьков с газом. Рис.6.  Рис.7.  Количество = слишком много колоний  На Рис.7 количество колоний так велико, зоны подкисления и пузырьки газа не видны. Светлый фон геля указывает на то, что количество колоний слишком большое для учета.  Рис.8.  Количество = слишком много колоний  На Рис.8 показано две особенности петрифильмов с очень большим количеством колоний для подсчета: 1) цвет геля становится светлым и 2) присутствует большое количество мелких колоний.  Пузырьки-артефакты и частицы продукта Рис.9.  Количество энтеробактерий = 44  Пузырьки-артефакты могут происходить в результате неправильной процедуры посева на петрифильм. Они имеют неправильную форму и не связаны с красными колониями.  Рис. 10.  Количество энтеробактерий = 2  Частицы продукта часто неправильной формы или нитевидные, не ассоциированы с пузырьками газа или зонами подкисления. Рис.10.   Рис.11. Количество энтеробактерий = 29  Частицы продукта также могут быть в виде темных пятен, но не связаны с пузырьками газа или зонами подкисления. Рис.11. 3М Petrifilm Enterobacteriaceae Count Plate (EB) –  Петрифильм для определения энтеробактерий    Хранение Хранить закрытые упаковки петрифильмов при температуре ≤8оС. Использовать петрифильмы до даты, указанной на упаковке. В местах повышенной влажности, где может скапливаться конденсат, перед открытием упаковки следует дождаться, пока петрифильмы нагреются до комнатной температуры. Для закрытия вскрытой упаковки следует согнуть край и заклеить клейкой лентой. Храните повторно закрытые упаковки при температуре ≤25оС и влажности ≤50%. Не хранить вскрытые упаковки петрифильмов в холодильнике. После вскрытия упаковки использовать петрифильмы не более одного месяца.    Подготовка образцов Приготовить разведение 1:10 или большие разведения образца. Взвесить образец продукта в стерильном пакете, флаконе или другом стерильном контейнере. Добавить соответствующее количество разбавителя  • фосфатный буфер  • 0,1% пептонная вода  • пептонно-солевая вода (ИСО 6887)  • забуф. пептонная вода (ИСО 6579) • физ.раствор • раствор Рингера  Не использовать буферные р-ры, содержащие цитрат, бисульфит или тиосульфат, которые могут ингибировать рост Гомогенизировать образец с использованием гомогенизатора, например, Masticator.  рН разведенного образца должен быть в диапазоне 6,6-7,2. Использовать 1М NaOH или 1М HC    Инокуляция (внесение образца на петрифильм) Поместить петрифильм на ровную поверхность. Приподнять верхнюю пленку. Добавить пипеткой 1 мл образца в центр нижней пленки. Аккуратно опустить верхнюю пленку (прокатывая); избегать захвата пузырьков. Не бросать верхнюю пленку.   Поместить распределитель ровной стороной вниз на верхнюю пленку, накрывая образец. ММягко надавить на распределитель для равномерного распределения образца по кругу. Не следует крутить или скользить распределителем по петрифильму. Поднять распределитель. Подождать, как минимум, одну минуту для затвердевания геля.    Инкубация                             Учет результатов  Инкубировать петрифильмы прозрачной стороной вверх. Петрифильмы можно складывать в стопки до 20 штук. В термостат можно установить емкость с водой для предотвращения потерь влаги на петрифильмах. Инкубировать в течение 24 ч ± 3 часа при 37± 1оС. Колонии можно учесть с помощью счетчика колоний или увеличительного стекла. Колонии можно изолировать для дальнейшей идентификации. Приподнять верхнюю пленку и отобрать колонию из геля.