Описание
Экспресс-тесты  Staph Express Count Plate предназначены для подсчета стафилококков в образцах пищевых продуктов, продовольственном сырье, смывах с объектов внешней среды.. Тесты содержат готовую питательную среду и гелеобразующее вещество. Используется модифицированная хромогенная среда на основе среды Байрд-Паркера для выявления Staphylococcus aureus. Красно-фиолетовые колонии на среде являются S.aureus. Если на петрифильме образуются колонии других цветов (например, черные или сине-зеленые колонии), то проводят идентификацию с использованием  диска Petrifilm Staph Express Disk. Данный диск содержит краситель (толуидин синий) и ДНК (дезоксирибонуклеиновую кислоту). S.aureus продуцирует фермент ДНК-азу, который реагирует с красителем и образует зоны розового цвета. При реакции с диском так называемые, коагулазоположительные стафилококки - S.aureus (иногда S.hyicus, и S.intermedius). Большинство других бактерий не образуют розовые зоны.

Хранение и утилизация
Хранить невскрытые упаковки с петрифильмами следует в холодильнике при температуре 2-8°C. Неиспользованные петрифильмы поместите обратно в упаковку. Чтобы предотвратить контакт с влагой, не храните открытые упаковки в холодильнике. Храните вновь запечатанные упаковки в сухом прохладном месте в течение не более одного месяца. Нахождение вскрытых упаковок петрифильмов при температуре более 25°C и/или относительной влажности свыше 50% может повлиять на их эксплуатационные качества. Не использовать петрифильмы, на которых присутствует коричневое окрашивание. Срок годности и номер партии указаны на каждой упаковке петрифильмов. 

Как и все системы для тестирования микроорганизмов, петрифильмы после использования могут содержать жизнеспособные бактерии, что может представлять потенциальную опасность. Следуйте современным стандартам методам инактивации и утилизации биологического материала.

Инструкция по использованию

Подготовка образца
Для разбавления образца использовать 0,1% пептонную воду, забуференную петонную воду, физиологический раствор или дистиллированную воду. Не использовать буферные растворы, содержащие цитрат, бисульфит или тиосульфат, т.к. эти соединения могут ингибировать рост бактерий. Смешать и гомогенизировать образец. Для оптимального роста бактерий довести рН разведенного образца до 6–8. Для коррекции рН кислых образцов используйте 1 н. NaOH. pH щелочных образцов довести с помощью 1 н. HCl. 

Внесение образца
1. Поместить петрифильм Staph Express Count Plate на ровную поверхность.
2. Поднять верхнюю пленку и внести 1 мл образца (или его разведения) в центр подложки.
3. Опустить верхнюю пленку на образец, избегать захват пузырьков воздуха.
4. Сразу же поместить пластиковый распределитель в центр петрифильма. Мягко надавить на центр, чтобы образец распределился равномерно. Не перемещать распределитель по пленке!
5. Убрать распределитель и оставить петрифильм на одну минуту для затвердевания геля. 

Инкубация
Инкубировать петрифильмы в горизонтальном положении прозрачной стороной вверх. Петрифильмы можно группировать в количестве не более 20. Инкубировать петрифильмы в течение (24±2) часов при (37±1)°C. 

Интерпретация
1. Количество колоний на петрифильмах Staph Express Count Plate можно учесть с помощью стандартного счетчика колоний или другого подсвечиваемого увеличителя.

2. Оценка цвета колоний
а) Если колоний нет или присутствуют только красно-фиолетовые колонии через (24±2) часа инкубации, то следует учесть все красно-фиолетовые колонии как S.aureus; тест завершен, диск Staph Express Disk не используется.
b) Если присутствуют колонии иного цвета, чем красно-фиолетовый, то следует использовать для подсчета S.aureus диск Staph Express Disk. 

Внимание! Высокий уровень фосфатазы, фермента, который  обычно содержится в некоторых пищевых продуктах, например, в сырых молочных продуктах, может окрасить всю среду в розовый цвет и маскировать красно-фиолетовые колонии. В этом случае следует использовать разведения образца.

3) Достать индивидуально запакованный диск Staph Express Disk из коробки, придерживая диск за выступ.

4) Приподнять верхнюю пленку петрифильма и поместить диск на поверхность. Выступ диска остается снаружи петрифильма.

Внимание! Иногда гель может разделиться при поднятии верхней пленки. Разделение геля не влияет на результат, поскольку диск активен с обеих сторон.

5) Опустить верхнюю пленку.

6) Прижать верхнюю пленку аккуратно по всей поверхности диска, включая края, для обеспечения одинакового контакта диска с гелем и удаления всех пузырьков воздуха.
- Если применено слишком большое давление гель может оказаться поврежденным, и зоны не будут отчетливыми.
- Если применено недостаточное давление, то гель может высохнуть, и зоны могут не образоваться.

7) Поместите петрифильмы с дисками в термостат, Петрифильмы можно группировать не более 20 штук. Инкубировать при (37±1)°C в течение от 60 минут до 3 часов. Проверять петрифильмы периодически. Окончательный результат по ДНК-азной реакции не позднее, чем через 3 часа.

8) Вынуть Петрифильмы из термостата. 

9) Учесть все розовые зоны, представляющие или нет колонии. Розовые зоны связаны с ростом S.aureus, или Staphylococcus hyicus и  Staphylococcus intermedius. Колонии без розовой зоны не являются S.aureus, и не должны учитываться. В случае, если весь диск розового цвета без четко выраженных зон, то присутствует большое количество S.aureus. Результат следует учесть как - количество колоний «слишком велико для подсчета» и следует развести образец, чтобы получить более точный результат.

10) При необходимости колонии можно изолировать для дальнейшей идентификации. Для этого следует поднять верхнюю пленку и извлечь колонию из геля. Если диск закрывает гель, то следует удалить диск и извлечь колонию из геля. Утилизация диска и стерилизация пинцета осуществляется стандартными методами. 

11) Если нет возможности провести подсчет в течение 3-х часов после окончания инкубации, то петрифильмы можно хранить в морозильнике в течение одной недели при температуре -15C°.

Staph Express Count Plate (STX) – Петрифильм для определения количества Staph.aureus Staph Express Count Plate (STX) – петрифильм для выявления и количественного учета Staph.aureus представляет собой тест-пластину, которая содержит готовую питательную среду, водорастворимый в холодной воде гель (затвердевающий при комнатной температуре). Хромогенная модифицированная среда Baird-Parker является селективной и дифференциальной для Staph.aureus. Красно-фиолетовые колонии на петрифильме – S.aureus.  При наличии нетипичных колоний (например, черные, сине-зеленые) для подтверждения можно использовать 3M Petrifilm Staph Express Disk – диск для подтверждения ДНК-азы. Диск содержит краситель и ДНК (дезоксирибонуклеиновую кислоту). S.aureus продуцирует ДНК-азу и ДНК-аза реагирует с красителем, образует розовые зоны. Когда диск помещается на среду петрифильма, S.aureus образует розовую зону. Большинство других бактерий не образуют зоны ДНК-азной активности.   Рис.1.  S.aureus = 11  На рисунке присутствуют только красно-фиолетовые колонии. Учесть все красно-фиолетовые колонии как S.aureus.  3M Petrifilm Staph Express Count Plate   Рис.2.  S.aureus = 0  Колонии отсутствуют после 24 часов инкубации.  Рис.3.  S.aureus = 24  Колонии S.aureus могут различаться по размерам. Подсчитать все красно-фиолетовые колонии независимо от размера. Использовать увеличительное стекло для детального просмотра колоний.   Рис.4.  S.aureus = 122  Верхний рекомендуемый предел подсчета - 150 колоний на петрифильме Petrifilm Staph Express Count Plate.  Рис.5.  Вычисленное кол-во S.aureus = 850  Если количество колоний превышает 150, то можно оценить число колоний, подсчитав количество в одном репрезентативном квадрате и умножить на 30.  3M Petrifilm Staph Express Disk  Диск для подтверждения ДНК-азной активности следует использовать, если цвет колоний отличается от красно-фиолетового, например, черный или сине-зеленый. Черные колонии могут быть S.aureus, сине-зеленые колонии – не S.aureus. Диск помещают между верхней и нижней пленкой петрифильма и инкубируют, при наличии ДНК-азы образуются розовые зоны.   Рис.6.  S.aureus = 17  Подсчитать количество колоний с розовыми зонами как S.aureus, независимо от размера зоны. Стрелка указывает на разрыв геля. Разрывы в геле не влияют на результат тестирования.   Рис.7.  S.aureus = 7  Частицы продукта, имеют, как правило, неправильную форму. При использовании диска колонии S.aureus легко отличить от частиц продукта благодаря розовой зоне ДНК-азной активности.  Рис.8.  S.aureus = 3  Иногда отдельные колонии S.aureus трудно отличить из-за частиц продукта или из-за большого количества других бактерий, которые могут вызывать обесцвечивание среды. В этих случаях следует поместить диск, инкубировать и учесть количество колоний с розовыми зонами.    Хранение Хранить закрытые упаковки петрифильмов при температуре ≤8оС. Использовать петрифильмы до даты, указанной на упаковке. В местах повышенной влажности, где может скапливаться конденсат, перед открытием упаковки следует дождаться, пока петрифильмы нагреются до комнатной температуры. Для закрытия вскрытой упаковки следует согнуть край и заклеить клейкой лентой. Храните повторно закрытые упаковки при температуре ≤25оС и влажности ≤50%. Не хранить вскрытые упаковки петрифильмов в холодильнике. После вскрытия упаковки использовать петрифильмы не более одного месяца. Приготовить разведение 1:10 или большие разведения образца. Взвесить образец продукта в стерильном пакете, флаконе или другом стерильном контейнере. Добавить соответствующее количество разбавителя • фосфатный буфер  • 0,1% пептонная вода  • пептонно-солевая вода (ИСО 6887)  • забуф. пептонная вода (ИСО 6579)  • физ.раствор  • раствор Рингера  Не использовать буферные р-ры, содержащие цитрат, бисульфит или тиосульфат, которые могут ингибировать рост Гомогенизировать образец с использованием гомогенизатора, например, Masticator.  рН разведенного образца должен быть в диапазоне 6,6-7,2. Использовать 1М NaOH или 1М HCl. Поместить петрифильм на ровную поверхность. Приподнять верхнюю пленку. Добавить пипеткой 1 мл образца в центр нижней пленки. Аккуратно опустить верхнюю пленку (прокатывая); избегать захвата пузырьков. Не бросать верхнюю пленку. Мягко надавить на распределитель для равномерного распределения образца по кругу. Не следует крутить или скользить распределителем по петрифильму. Поднять распределитель. Подождать, как минимум, одну минуту для затвердевания геля.      Инкубация                             Учет результатов  Инкубировать петрифильмы прозрачной стороной вверх. Петрифильмы можно складывать в стопки до 20 штук. В термостат можно установить емкость с водой для предотвращения потерь влаги на петрифильмах. Инкубировать в течение 24 ч ± 2 часа при 37± 1оС. Если после 24 часов инкубации на петрифильме колонии отсутствуют, то тест считается завершенным, S.aureus в образце нет. Колонии можно учесть с помощью счетчика колоний или увеличительного стекла.   Если цвет колоний отличается от  красно-фиолетового, то для подтверждения следует использовать диск Petrifilm Staph Express Disk Вынуть диск из индивидуальной упаковки. Поднять верхнюю пленку петрифильма и поместить диск между верхней и нижней пленками. Прикрыть диск верхней пленкой. Мягко надавить на верхнюю пленку в области диска для обеспечения плотного контакта между диском и гелем.   Инкубировать петрифильмы с вложенными дисками в течение 2-3 часов при 37оС. Петрифильмы можно складывать в стопки в количестве не более 20 штук. Учесть количество розовых зон, независимо от наличия колоний. Колонии можно изолировать для дальнейшей идентификации. Приподнять верхнюю пленку и отобрать колонию из геля.