 |
 |
 |
 |  |
|
|
3M Petrifilm Salmonella Express (SALX) Plate (Кат.№ 6536, 6538) – Петрифильмы для обнаружения сальмонелл Информация для заказа
3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System (3M™ Petrifilm™ SALX) Система для обнаружения сальмонелл включает: - Диск для экспрессного биохимического подтверждения сальмонелл (3M™ Petrifilm™ Salmonella Express Confirmation Disk)
Ход анализа: 2) Перенести 0,1 мл культуральной жидкости со среды обогащения к 10 мл селективного бульона Раппапорт-Вассилиадис RV R10. Инкубировать 8 часов при 41,5°C. Примечание: пункт (2) применяется только для продуктов с высоким показателем ОМЧ ≥ 104 клеток/грамм (сырые продукты); для продуктов с низким показателем ОМЧ ≤ 104 клеток/грамм (термически обработанные продукты) следует пропустить пункт (2) и сразу перейти к пункту (3). 3) Посеять петлей на поверхность петрифильма 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Plate. Инкубировать 24 ± 2 часа при 41,5°C. 4) Поместить подтверждающий диск на петрифильм для биохимического подтверждения сальмонелл и инкубировать 4 часа при 41,5°C и учесть результаты. Преимущества: - Ускоренный метод. Обнаружение и подтверждение сальмонелл за 44 часа - Биохимическое подтверждение колоний за 4 часа. Система 3M Petrifilm Salmonella Express System позволяет сразу же провести биохимическое подтверждение всех характерных колоний сальмонелл на подтверждающем диске. Нет необходимости пересевать каждую колонию на чашки с агаром или отправлять образцы в референсную лабораторию для биохимического подтверждения. - Надежность результатов. Ошибки, которые случаются при приготовлении питательных сред, при использовании петрифильмов исключены. Используется уже готовая среда на подложке с проверенными характеристиками качества. - Длительный срок хранения. Срок годности системы 3M Petrifilm Salmonella Express Plates значительно превосходит допустимые сроки хранения для чашек Петри с готовой агаризованной средой. - Компактность. Петрифильмы занимают на 85% места меньше по сравнению с готовыми средами на чашках Петри, освобождая место в термостатах, холодильниках, ламинарах и автоклавах (при утилизации отходов). Система 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System позволяет повысить производительность и эффективность работы в лаборатории, получить надежные и точные результаты. Сертификация Информация для заказа:
Статья в журнале "Молочная промышленность", №4, 2014 Ускоренный метод обнаружения сальмонелл в пищевых продуктах с использованием петрифильмов 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System Глобальный мониторинг за пищевыми инфекциями, проводимый ВОЗ, показал, что 47 % всех вспышек были вызваны сальмонеллами, причем 34 % связаны с потреблением куриного мяса [5]. Источниками инфекции также могут быть молоко, сливочное масло, сыр: в молоке сальмонеллы выживают до 20 дней, в сливочном масле – 4 мес, в сырах – 1 год, в замороженном мясе – 2–3 года [6]. Основной путь заражения при сальмонеллезе – алиментарный. Факторами передачи возбудителей сальмонеллеза являются, как правило, продукты животного происхождения. В настоящее время чаще всего заболевания возникают при употреблении в пищу инфицированных яиц или продуктов, в состав которых входят яйца. Ряд заболеваний связан с инфицированным сальмонеллами мясом и мясопродуктами. Инфицированными могут быть и продукты растительного происхождения (овощи, фрукты, ягоды), а также дрожжи, кондитерские красители. Даже при интенсивном размножении в пищевых продуктах сальмонеллы не изменяют их вкус, запах или внешний вид [1]. Определение сальмонелл в пищевых продуктах и сырье, а также различных объектах окружающей среды является одним из ключевых звеньев многоуровневой системы профилактики острых кишечных инфекций вообще и сальмонеллеза в частности. Классический метод определения сальмонелл В сфере санитарно-микробиологического контроля пищевых продуктов «золотым стандартом» по-прежнему остается бактериологический метод. Он позволяет выявлять и идентифицировать патогенные и санитарно-показательные микроорганизмы, характеризующие эпидемическую опасность исследуемых продуктов. Однако из-за своей продолжительности, трудоемкости и громоздкости классический «чашечный» метод все меньше отвечает реалиям современной жизни, не поспевая за масштабностью и динамичностью развития пищевого производства. Рутинный технологический контроль сырья и продуктов питания нуждается в экспрессных методах, позволяющих оперативно принимать решения. Согласно ГОСТ Р 52814–2007 (ИСО 6579:2002) «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella» [3] методика определения сальмонелл в продуктах питания является сложным, многостадийным процессом, главные недостатки которого – длительность и трудоемкость. Алгоритм определения сальмонелл согласно этому документу подразумевает неселективное обогащение подготовленного образца в забуференной пептонной воде в течение 18±2 ч, затем селективное обогащение не менее чем в двух жидких элективных средах в течение 24±3 ч с последующим высевом на плотные среды (табл. 1). В качестве элективных рекомендуются магниевая среда Раппопорт–Вассилиадиса, селенитовый бульон или тетратионатная среда Мюллера–Кауфманна. Из каждой среды селективного обогащения высев производится не менее чем на две плотные среды, XLD агар и еще одну: висмут-сульфит агар, среду с бриллиантовым зеленым, среду Эндо, Левина или Плоскирева. Согласно большинству других отечественных документов [3] основной плотной средой для высева из обогащения является висмут-сульфитный агар. Инкубация на плотных средах проводится 24±3 ч для большинства сред или 48±2 ч для висмут-сульфитного агара с первичным учетом через 24 ч. Таким образом, минимальное время получения отрицательного ответа 18+24+48 = 90 ч. При наличии типичных колоний, подозрительных на принадлежность к роду Salmonella, время анализа существенно увеличивается. Репрезентативное число типичных колоний отсевают на среду Клиглера или Олькеницкого (18±2 ч), затем при наличии типичных свойств выполняют биохимическую и при необходимости серологическую идентификацию вначале до рода, затем до серотипа (не менее 48 ч). Таким образом, окончательный положительный ответ при использовании классического метода получают в среднем через 140–160 ч. Не следует также забывать о трудоемкости метода, связанной прежде всего с приготовлением, хранением и утилизацией питательных сред. Для исследования каждого образца используется одна среда неселективного обогащения, две жидкие среды селективного обогащения и по две чашки каждой из двух плотных селективных сред. При наличии типичного роста количество сред для идентификации будет исчисляться десятками пробирок и чашек.
Система ускоренного обнаружения сальмонелл Для ускорения процедуры анализа в состав современных питательных сред помимо селективных добавок, подавляющих рост нецелевой микрофлоры, вносятся специальные хромогенные добавки, позволяющие определять маркеры, высокоспецифичные для той или иной группы целевых микроорганизмов. Использование таких добавок дает возможность облегчить учет и сократить длительность анализа за счет исключения этапа идентификации. В хромогенных средах для определения сальмонелл чаще всего используются хромогенные добавки на основе пропиленгликоля, который сальмонеллы способны разлагать, в отличие от других бактерий. Еще одним перспективным решением, упрощающим процедуру бактериологического анализа, является использование питательных сред на специальных подложках. Срок хранения таких сред не уступает сухим, а способ применения заметно проще, так как исключаются этапы приготовления, стерилизации и разливки, нет необходимости в подготовке посуды, а инокуляция пробы в большинстве случаев не требует сложных манипуляций. Компания 3М (США) разработала тест-системы 3M™ Petrifilm™ (петрифильмы) – питательные среды на подложке. Петрифильмы предназначены для санитарно-микробиологического контроля пищевых продуктов и широко используются во всем мире. Только в странах EC тест-пластины 3M™ Petrifilm™ используют более 3000 производителей. С 2011 г. 3M™ Petrifilm™ рекомендованы Роспотребнадзором РФ для применения в производственных лабораториях, контролирующих производственное сырье и пищевые продукты, а также в испытательных лабораториях Роспотребнадзора и Россельхознадзора, сертификационных центрах и других организациях, аккредитованных на право проведения микробиологических исследований [4]. Тест-системы 3M™ Petrifilm™ позволяют определять такие показатели микробиологического качества пищевых продуктов, как КМАФАнМ, дрожжи и плесени, БГКП (ЛКП), E.coli, S.aureus, Listeria spp. и молочнокислые бактерии. В 2013 г. компания 3М анонсировала новую тест-систему 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System, предназначенную для ускоренного определения сальмонелл бактериологическим методом (рис. 1). Компоненты тест-системы 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System приведены в табл. 2. Данная тест-система соединяет в себе элементы классического метода с преимуществами питательных сред на подложках и подразумевает два алгоритма исследования в зависимости от общей степени контаминации образцов. Сильно контаминированными считаются образцы, в которых уровень КМАФАнМ превышает 104 КОЕ/г. Образцами с низкими уровнями контаминации, как правило, являются пищевые продукты, прошедшие термическую обработку. Первичное обогащение подготовленного образца осуществляется в фирменной среде обогащения – 3M™ Salmonella Enrichment Base, в которую перед использованием добавляется специальная ростовая добавка – 3M™ Salmonella Enrichment Supplement. Образцы инкубируют 18 ч при 41,5 °C. Далее обогащенные образцы с низкой степенью контаминации высевают петлей на заранее подготовленные подложки 3M™ Petrifilm™ SalmonellaExpress (SALX) Plate для получения изолированных колоний (рис. 2). Посевы инкубируют 24 ± 2 ч при 41,5 °C. При исследовании образцов с высокой степенью фоновой контаминации обогащенный образец перед высевом на подложку подвергают дополнительному этапу селективного обогащения в среде Раппопорт–Вассилиадиса в течение 8 ч при 41,5 °С [2]. После инкубации посевы на подложках просматривают на наличие типичных колоний: красных колоний, ассоциированных с зоной пожелтения вокруг колонии; красных, ассоциированных с пузырьками газа; красных колоний, обладающих обоими признаками. При отсутствии типичных колоний выдается отрицательный результат, время получения которого составит для низкоконтаминированных образцов 38–44 ч, а для высококонтаминированных – 48–52 ч, что в 2 раза быстрее по сравнению с классическим методом (см. табл. 1). При наличии типичных колоний их отмечают маркером на пленке, покрывающей питательную среду на подложке, и проводят биохимическую идентификацию путем наложения на посев специального диска 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express (SALX) Confirmation Disk, покрывающего всю площадь посева (см. рис. 2). Подложку вместе с диском инкубируют 4 ч при 41,5 °C. Сальмонеллами будут считаться бактерии, образующие типичные колонии, которые при инкубации с диском меняют свой цвет с красного на черно-синий [6]. Таким образом, использование 3M™ Petrifilm™ Salmonella Express System позволяет получить биохимически подтвержденный положительный результат уже через 42–56 ч, что в 3 раза быстрее по сравнению с классическим методом (см. табл. 1).
|
