13. Выявление и определение количества бактерий семейства Enterobacteriaceae

13.1. Для определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae (далее энтеробактерий) применяется тип петрифильма  – «3М™ Petrifilm™ Enterobacteriaceae Count Plate (EB)». Петрифильм (ЕВ) содержит основу среды VRBG (кристаллический фиолетовый с желчью и глюкозой). Среда содержит тетразолиевый индикатор, который окрашивает колонии в красный цвет. При ферментации глюкозы энтеробактерии образуют желтые зоны подкисления вокруг колоний пузырьками с газа или без них. 

13.2. Методы отбора проб по п. 7.

13.3. Подготовка образца к испытанию по п. 8.

13.4. Подготовка петрифильмов к испытанию по п. 9.

13.5. Порядок проведения испытания.

13.5.1. Петрифильм помещают на ровную поверхность. Приподнимают верхнюю пленку.

13.5.2. Из исследуемого образца или его разведения,  приготовленного по п.13.3, отбирают пробу объемом  (1,0±0,1) см3и вносят на поверхность подложки в центр петрифильма. Аккуратно опускают верхнюю пленку петрифильма, избегая захвата пузырьков воздуха.

13.5.3. Помещают пластиковый распределитель в центр петрифильма плоской стороной вниз. Мягко надавливают на центр распределителя для равномерного распределения образца. Не следует перемещать или крутить распределитель по петрифильму!

13.5.4. Убирают распределитель и оставляют петрифильм на 1-2 минуты для затвердевания геля.

13.5.5. Посевы инкубируют при температуре (37±1)°C в течение (24±2) ч в горизонтальном положении прозрачной стороной вверх при повышенной влажности. Допускается размещать петрифильмы друг на друга по 20 штук.

13.6. Обработка результатов.

13.6.1. После инкубирования посевов по п.13.5.5 подсчитывают количество колоний визуально или автоматически (с помощью Петрифильм-Ридера – 3М™ Petrifilm™ Plate Reader). Энтеробактерии образуют красные колонии с желтыми зонами и пузырьками газа (или без них). Колонии, которые не образуют желтые зоны или не образуют газ не являются энтеробактериями.

13.6.2. Для подсчета отбирают петрифильмы, на которых выросло от 15 до 150 колоний по ГОСТ 29184-91. Полученный результат умножают на величину соответствующего разведения и получают количество колоний энтеробактерий в 1,0 см3(г) образца.

13.6.3. Результат исследований округляют и записывают по ГОСТ 26670.

13.6.4. При необходимости колонии могут быть изолированы для дальнейшей идентификации по ГОСТ 29184.

Примечание.
Не учитывают колонии, выросшие на пенопластовом ограничителе зоны роста. 

При окрашивании зоны роста петрифильма в желтый цвет, при сильном потемнении зоны роста, а также при наличии большого числа мелких колоний для получения количественного результата готовят разведения образца и заново проводят анализ.